Wie weißt man Aminosäuren in Proteinen nach?

[littleOrange]

Ich soll einen Praktikumsversuch beschreiben, mit dem ich zeigen kann, dass in Gliadinen die Aminosäuren Leucin, Prolin, Glutamin und Phenylalanin enthalten sind.

Leider habe ich keine Ahnung. Ich weiß dass man Penylalanin mit der Xanthoproteinreaktion nachweisen kann, aber mehr auch nicht. Vllt sollte man das Protein in die Primärstruktur zerlegen, damit die Sequenz sichtbarer wird?

Oder gibt's dafür vllt einen spezifischen Versuch?




*weist, nicht weißt

[chemiewolf]

man kann das Protein sauer hydrolysieren, d.h. in alle AS zerlegen und dann die einzelnen AS z.B. massenspektroskopisch nachweisen.

[imalipusram]

Zitat von littleOrange

Penylalanin mit der Xanthoproteinreaktion nachweisen

Tyrosin stoert, das wird auch nitriert.

Vorschlag: Totalhydrolyse mit Salzsaeure, dann Trennung der Aminosaeuren mittels Duennschichtchromatographie, Vergleich mit den Reinsubstanzen. Nachweis mit Ninhydrin. Oder Derivatisierung mit einem aminoreaktiven Fluoreszenzfarbstoff (zB Dansylchlorid oder FITC), dann Trennung mittels HPLC und Nachweis mittels Fluoreszenzdetektor. Auch hier Vergleich mit Referenzsubstanzen, Identifikation ueber die Retentionszeit.

Warum gerade Gliadin? Das loest sich nicht im Waessrigen (60% EtOH ist das Standardloesungsmittel fuer G.).

[littleOrange]

Erstmal danke für die Antworten!

Das ist eine Abituraufgabe, die ich lösen muss.
Leider sagt mir das alles nichts, ich bin erst in der 11. Klasse. Gibt's da nichts "schülertauglicheres"?

[littleOrange]

und wie könnte man das sauer hydrolysieren?

[imalipusram]

Zitat von littleOrange

und wie könnte man das sauer hydrolysieren?

Vielleicht hilft Dir das hier weiter:
http://www2.uni-jena.de/biologie/biochemphys/biochem/Lehre/versuch_7.pdf.

[littleOrange]

danke.

Das heißt es gibt nur diese Möglichkeit?

[Fulvenus]

Zitat von littleOrange

danke.

Das heißt es gibt nur diese Möglichkeit?

Prinzipiell reicht Totalhydrolyse des Peptids und ein dünnschichtchromato-graphische Analyse("DC" des Hydrolysats.Dazu müßte man von den genannten AS Referenzsubstanzen haben,um darüber zu identifizieren.Siehe dazu z.B. hier:
http://www.chids.de/dachs/praktikumsprotokolle/PP0317G10_V27_Duennschichtchromatographie_von_AS.pdf .
Für die Hydrolyse müßte man eine geeignete Vorschrift suchen.

Fulvenus!

[Daniel30]

Zitat von littleOrange

danke.

Das heißt es gibt nur diese Möglichkeit?

Wenn man keine sauteuren Analysegeräte hat.
Aber mit Säure die Proteine in einzelne Aminosäuren zerlegen und dann per Dünnschichtchromatographie trennen und mit Vergleichssubstanzen testen funktioniert einigermaßen gut.

[littleOrange]

ok vielen Dank, ich frag nur, weil wir das in der Schule noch nicht behandelt haben und man da eigentlich nicht selbst drauf kommen kann :-)