Tris-HCL Puffer - Praxis vs Theorie

[xPae]

Hey ich soll einen 0,02M Tris-HCL +0,6M NaCL Puffer herstellen.
Das ist für die Affinitätschromatrographie zur Isolierung von Plasmin.
Berechnung:
pKs=8,08 pH=7,4 M_Tris=121,14g/mol V=200ml

Über HH-Gleichung:
0,208=Tris/HCL-Tris
daraus folgt über c_Puffer=c_säure+c_base
c_Tris=7x10^(-4)mol/200ml =>(mal 121,14g/mol) 84,8mg

c_Säure=0,003mol/200ml
Wenn ich jetzt meinetwegen eine 0,1M HCL da habe bräuchte ich ca:
1000ml<=>0,1mol
-> 1000ml/30=33,33ml<=>0,003mol
Wenn ich jetzt allerdings das Tris abwiege und dann den pH über das pH-Meter einstelle, muss ich sehr viel weniger HCL verwenden!
Stimmt was bei meiner Berechnung nicht, oder wie ist das zu erklären?
"nur" durch den veränderten pKs bei Temperaturunterschieden und pKs=8,08 ist für "meine" temperatur falsch gewählt?
Danke und beste Grüße
achso das NaCl:
0,6M => 0,6/5mol/200ml

dann mit Molmasse mal nehemen -> ca. 7 Gramm - das erscheint mir relativ viel, jedoch ist 0,6molar ja auch ziemlich hoch!
xPae

[MartinaKT]

Hm, also ich kenne das so, dass du für dein gewünschtes Volumen und deine gewünschte Konzentration ausrechnest wieviel TRIS du brauchst. Also in deinem Fall die Masse an TRIS für 200 mL Wasser.

Dann löst man nicht sofort in 200 mL, sondern einem geringeren Volumen, meinetwegen 100 oder 150 mL, und stellt den gewünschten pH mit HCl ein (meist konzentrierter man kann aber natürlich auch verdünnte nehmen) und zum Schluss wird auf das gewünschten Volumen (hier 200 mL) mit Wasser aufgefüllt. Fertig!


Bzgl. deines NaCl, da versteh ich nicht ganz was du rechnest (bzgl. er 5 mol?). Du willst also in den 200 mL eine Konzentration von 0.6 M NaCl. M = 58,44 g/mol.
c = n/V
n = m/M

Und dann kommt am Ende 7 g raus. Das passt schon!

[Gustavus]

Vergleiche evt. mal mit der Rezeptur hier: http://www.liv.ac.uk/buffers/buffercalc.html