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Alt 03.05.2009, 23:43   #1   Druckbare Version zeigen
ramrok Männlich
Mitglied
Themenersteller
Beiträge: 19
Solubilisierung von Proteinen

Hallo habe ein paar Fragen zur Solubilisierung von Proteinen.
Wie macht man das in der Praxis ,hat da jemand schon Erfahrung ?
Weiß dass man Proteine mit chaotropen Agentien (hohe Konzentration) solubilisieren kann(zB. Harnstoff,Gnd-HCl). Wie mach ich das praktisch?
In einem Reagenzglas,zuerst Puffer dann chaotrope Agentien ? Wie sehe ich dass ein Protein erfolgreich solubilisiert wurde ( keine Präzipitation) ?
Bin echt froh ,wenn mir jemand die praktische Vorgehensweise beschreibt
Danke
ramrok ist offline   Mit Zitat antworten
Alt 04.05.2009, 19:58   #2   Druckbare Version zeigen
Dismutase Männlich
Mitglied
Beiträge: 217
AW: Solubilisierung von Proteinen

Hallo,

aus Erfahrung: wie so oft gibt es (leider) keine Generalrezepte.
Das Verfahren und die Wahl des Detergens ist durchaus vom Protein abhängig (exprimiert, membrangebunden, Enzym etc.) und am besten in der einschlägigen Literatur oder geeigneten Veröffentlichungen nachzulesen.

Zitat:
Weiß dass man Proteine mit chaotropen Agentien (hohe Konzentration) solubilisieren kann(zB. Harnstoff,Gnd-HCl) ....
ist falsch. Damit erreicht man das Gegenteil; Proteine werden ausgefällt.

Um welche(s) Protein(e) handelt es sich denn?

Gruß,
SOD
Dismutase ist offline   Mit Zitat antworten
Alt 04.05.2009, 20:20   #3   Druckbare Version zeigen
ramrok Männlich
Mitglied
Themenersteller
Beiträge: 19
AW: Solubilisierung von Proteinen

Ich soll Standardproteine zB.Lysozym ,Ribonuclease A solubilisieren .
Hohe Konzentration von chaotropen Agentien ( 6-8 molar ) ,soll die Proteine aus inclusion bodies solubilisieren (Proteine werden reversibel denaturiert ),anschließend sollen diese Agenzien entfernt werden durch Austausch mit Renaturierungpuffer(in diesem renaturieren die Proteine wieder).

ramrok ist offline   Mit Zitat antworten
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