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Alt 27.02.2018, 22:45   #1   Druckbare Version zeigen
Azofarbstoff Männlich
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Verständnisprobleme bei Exonuclease Verdau

Hallo zusammen!

ich lerne gerade für eine Biochemieklausur und habe Probleme beim Verständnis des DNA Verdaus via Exonuclease oder besser gesagt, bei der PCR davor. In der Vorlesung wird von einer dsDNA ausgegangen an der die 5' Enden dephosphoryliert wurden und anschließend wird eine PCR mit zwei Primern durchgeführt, bei denen aber nur einer (reverse Primer) phosphoryliert vorliegt. Das Ergebnis ist eine dsDNA deren sense strand dephosphorylisiert ist und der antisense ist entsprechend dem reverse Primer am 5' Ende phosporylisiert und wird von der Exonuclease verdaut.

Ich verstehe nun nicht, wie man da hinkommt. Bei einer PCR habe ich erstmal strand displacment, der reverse Primer mit dem Phosphat lagert an den sense strand an und man hat das gewünschte Produkt. Der forward Primer ist nun aber nicht phosphorlyisiert und lagert an den antisense strand an. Ich habe also eine nicht phosphorylisierte dsDNA. Im nächsten Cylce wird werden die Stränge wieder getrennt und der rev. Primer lagert an den sense strand an, dieser ist phosphorylisiert, der andere wiederum nicht.

Habe ich dann nicht nach der PCR einen Anteil an dsDNA die nicht phosphoryliert ist und demnach auch nicht zur ssDNA verdauut wird? Oder habe ich da irgendwas falsch verstanden?

Geändert von Azofarbstoff (27.02.2018 um 22:54 Uhr)
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