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Alt 05.01.2012, 14:52   #1   Druckbare Version zeigen
hyddl weiblich 
Mitglied
Themenerstellerin
Beiträge: 1
PCR-Produkt nochmals amplifizieren?

Hallo,
für meine Klonierungsstrategie brauche ich ein reines PCR-Produkt. Da bei der PCR (50 µl Ansatz) zwei schwache Nebenbanden entstanden sind, habe ich das gewünschte Fragment per Gelextraktion isoliert. Leider liegt die Ausbeute bei nur 50 ng/µl. Ist es eigentlich möglich, das nun reine PCR-Produkt nochmals als Template für eine PCR einzusetzten?? Oder stören Salzkonzentration oder ähnliches?
Danke für eure Hilfe :-)
hyddl ist offline   Mit Zitat antworten
Alt 05.01.2012, 15:08   #2   Druckbare Version zeigen
imalipusram Männlich
Mitglied
Beiträge: 7.190
AW: PCR-Produkt nochmals amplifizieren?

sollte klappen. Nimm 1µl des gereinigten Materials.
imalipusram ist offline   Mit Zitat antworten
Alt 18.01.2012, 11:39   #3   Druckbare Version zeigen
elixier  
Mitglied
Beiträge: 134
AW: PCR-Produkt nochmals amplifizieren?

50-70 ng/µl ist bei mir die Standardausbeute nach Gelextraktion eines PCR-Produktes und hat bei mir eigentlich meistens beim Klonieren zum gewünschten Ergebnis geführt. Hast du schon probiert, damit weiterzumachen? Ansonsten sollte eine neue PCR auch kein Problem sein.
elixier ist offline   Mit Zitat antworten
Alt 18.01.2012, 13:09   #4   Druckbare Version zeigen
imalipusram Männlich
Mitglied
Beiträge: 7.190
AW: PCR-Produkt nochmals amplifizieren?

Zitat:
Zitat von MoHe Beitrag anzeigen
3min 72 Grad mit etwas klassischer Taq anhaengen
geht das, wenn die Pwo/Pfu noch im Ansatz ist? Letztere sollte den Überhang sofort wieder entfernen. Oder ist nach 35 Zyklen einfach kaum noch proofreading-Polymerase da, sodaß die Taq einfach gewinnt?
__________________
I solemnly swear that I'm up to no good!
伍佰 (WuBai - Run run run!) (ein Musikvideo mit dem Bambushaus und dem imalipusram unter den Statisten)
Noch ein nettes Video (nerdy, ein LIHA-Robot)
Und so gehts hier manchmal zu (sowas Ähnliches wie Fronleichnam, hier wird TuDiGong, dem Erdgott, tüchtig eingeheizt!) Oder so (auch ungeeignet für Gefahrstoffphobiker) und so und so.
imalipusram ist offline   Mit Zitat antworten
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Stichworte
anreichern, gelextraktion, klonierung, pcr, pcr-produkt

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