Gelfiltration (Trennung aufgrund unterschiedlicher Molmassen)
Prinzip: Proengröße des Gelmaterials entspricht der Größe der zu trennenden Proteine -> kleine Moleküle können in die Poren eindringen, verlassen die Säule daher später als große Moleküle, die mit dem flow durch die Säule wandern.
Affinitätschromatographie (Trennung aufgrund unterschiedlicher Spezifität)
hoher Reinigungsgrad durch Ausnutzung der biologischen Funktionen des Proteins
a) spezifische Erkennung (z.B.: Antikörper)
b) speizifische biochemische Reaktion (z.B.: enzymatische Aktivität)
Markus H.
12.02.2002, 20:34
hi, bevor ich hier zuviel schreibe: müsst ihr es selbst durchführen oder geht es darum, die möglichkeiten (für profis) aufzuzählen und zu erklären? solltet ihr selbst trennungen vornehmen wollen: vergiss die affinitätschromatographie, auch die gelfiltrationschromatographie ist, denke ich, nicht wirklich durchführbar in schullabors und auch ELISA ist eher aufwendig / aufwändig (grrr)...
nobody
12.02.2002, 22:27
Ich dachte immer beim ELISA wäre der Reinigungsschritt in der Durchführung mitinbegriffen.
mfg rob
JJFox
13.02.2002, 12:09
Originalnachricht erstellt von robertxcta
Ich dachte immer beim ELISA wäre der Reinigungsschritt in der Durchführung mitinbegriffen.
Daß der ELISA-Test proteinreinigende Wirkung besitzt wäre mir neu. Üblicherweise wird das schon gereinigte Protein aufgetragen.
Affinitätschromatographie mit Immunglobulinen (vornehmlich IgG) geht hervorragend (z.B. mit immobilisiertem Protein A bzw. G), ist aber teuer. Gelfiltration allein wird vermutlich nicht ausreichen, um ausreichend reine Ig zu kriegen. Aber wo um alles in der Welt kriegt Ihr denn menschliche Milch her? Ich kann mich nur MaskusH anschließen: Sollt Ihr das tatsächlich im Schullabor versuchen? Schreib mal genauer, worum es geht!
Wenn man bedenkt, daß beim ELISA nur passende Antikörper gebunden bleiben, ist das schon eine Aufreinigung (aber nicht des Zielproteins, das ist ja bereits gereinigt und immobilisiert worden). Allerdings selektiert man dabei nur eine einzige spezifische Antikörperpopulation. Übrigens gibt's auch RIA (Radio Immuno Assay), aber ich nehme mal nicht an, daß Ihr mit radioaktiven Sachen (Iod!) rumspielen dürftet...
nobody
17.02.2002, 14:15
Es ist ein Diplomprojekt, wir präsentieren es bei der Matura.
Es ist durchaus möglich dieses Projekt bei uns im Labor durchzuführen!
Im AKH Wien wird ein Projekt mit menschlicher Muttermilch durchgeführt, das ist unser "Milchmann" sozusagen!
Danke dür eure HIlfe!
mfg sidney
nobody
18.02.2002, 10:31
Wenn's nur um's Prinzip ginge, würde Kuhmilch wohl auch ausreichen. Ist aber nicht so spektakulär :D .
Als Nachweis könnte man z.B. Gelelektrophorese mit Western Blot machen; Antikörper gegen menschliches IgG kann man kaufen (auch mit einem Enzym dran, zum Beispiel Phosphatase oder Peroxidase). Allerdings sollte man bei so einer Anreicherung schon durch klassische Proteinanfärbung im Gel die passenden Banden sehen. Den Western Blot würde man eher wegen der Spezifität, nicht wegen der Empfindlichkeit nehmen. Aber das übersteigt langsam wirklich Schulmethoden. Welchen Aufwand (zeitlich und materiell) könnte/wollt Ihr denn treiben?